1) 組織總蛋白的提取

a. 以1mL預冷的裂解液中加入10μL的磷酸酶抑制劑A管和10μL的磷酸酶抑制劑B管、10μL蛋白酶抑制劑的比例混勻，放置在冰上備用；

b. 稱取0.1g組織，剪碎，然后加入0.5-1mL的裂解液（可同比放大用量），勻漿或研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程于冰上操作；

c. 將組織勻漿液移入1.5mL的EP管中，4℃，10000-14000g離心3-5min；吸取上清至新的管中；

d. 進行蛋白定量等后續實驗或者保存于-80℃冰箱，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。

2）細胞總蛋白的提取

以1mL預冷的裂解液中加入10μL的磷酸酶抑制劑A管和10μL的磷酸酶抑制劑B管、10μL蛋白酶抑制劑的比例混勻，放置在冰上備用；裂解混合液的用量：10^7個細胞需要裂解液1mL；

a. 貼壁細胞

棄去培養基，用預冷的PBS輕柔地清洗細胞表面兩遍，棄去PBS，然后按細胞數加入裂解混合液，于細胞瓶、培養板或培養皿中，用移液管吹散貼壁的細胞，對于貼壁緊的細胞也可使用細胞刮刀，再移入EP管中，冰上放置2-10min，期間劇烈震蕩 3-4次，每次30秒。充分裂解后，4℃，10000-14000g離心3-5min；將上清移入新的EP管中；進行蛋白定量或者后續蛋白實驗。

b. 懸浮細胞

4℃，500 g離心5 min，去上清，沉淀用預冷的PBS洗滌兩遍，按細胞數加入裂解混合液，冰上放置2-10min，期間劇烈震蕩 3-4次，每次30秒。充分裂解后，4℃，10000-14000g離心3-5min；將上清移入新的EP管中；進行蛋白定量或者后續蛋白實驗。

（提取的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。)

注：裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，如NF-κB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。